【摘要】本發(fā)明涉及用下述方法制備的于植物秸稈料的纖維素酶解助劑：將植物秸稈粉料進(jìn)行水清洗、過濾得細(xì)胞壁濾渣；按配比加入含20－50mM抗壞血酸VC、質(zhì)量百分比0.1－0.5％巰基乙醇、1－5mM PMSF、5－10mM EDTA的0.1－0
【摘要】 本發(fā)明公開了一種玉米胚乳ADP－葡萄糖焦磷 酸化酶突變體及其篩選方法與應(yīng)用。該篩選方法包括以下步 驟：1)用鹽酸羥胺突變劑對(duì)玉米胚乳AGPase大小亞基cDNA 在70－80℃溫浴條件下進(jìn)行隨機(jī)突變；2)將經(jīng)突變的玉米胚乳 AGPase大小亞基cDNA和作為對(duì)照的野生型玉米胚乳AGPase 大小亞基cDNA分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌glgC突變菌株，篩選陽性 單克隆；3)將陽性克隆劃線接種于Conberg加富固體培養(yǎng)平板 上，在35－39℃下培養(yǎng)；4)用碘－碘化鉀溶液對(duì)在Conberg加 富固體培養(yǎng)平板上長(zhǎng)出的單菌落進(jìn)行染色，與對(duì)照菌落的顏色 進(jìn)行比較，比對(duì)照顏色深的為突變體菌株，再經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，得 到玉米胚乳ADP－葡萄糖焦磷酸化酶突變體。本發(fā)明的玉米胚 乳ADP－葡萄糖焦磷酸化酶突變體及其篩選方法將在玉米的 品種改良中發(fā)揮重要作用。 【專利類型】發(fā)明申請(qǐng) 【申請(qǐng)人】中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 【申請(qǐng)人類型】學(xué)校 【申請(qǐng)人地址】100094北京市海淀區(qū)圓明園西路2號(hào) 【申請(qǐng)人地區(qū)】中國(guó) 【申請(qǐng)人城市】北京市 【申請(qǐng)人區(qū)縣】海淀區(qū) 【申請(qǐng)?zhí)枴緾N200610144383.5 【申請(qǐng)日】2006-12-05 【申請(qǐng)年份】2006 【公開公告號(hào)】CN1970744A 【公開公告日】2007-05-30 【公開公告年份】2007 【授權(quán)公告號(hào)】CN100562571C 【授權(quán)公告日】2009-11-25 【授權(quán)公告年份】2009.0 【發(fā)明人】王國(guó)英; 王章英; 陳小平; 王建華 【主權(quán)項(xiàng)內(nèi)容】1、一種篩選玉米胚乳ADP-葡萄糖焦磷酸化酶突變體的方法，包括以下步驟： 1)用鹽酸羥胺突變劑對(duì)玉米胚乳AGPase大小亞基cDNA在70-80℃溫浴條件下進(jìn) 行隨機(jī)突變；所述鹽酸羥胺突變劑配方為：0.15-0.25g鹽酸羥胺，125mM？pH7.0的焦 磷酸鈉1.0-1.6mL，1M的NaCl？0.2-0.4mL，500mM？pH8.0的EDTA？10-14μl，用無離 子水定容至3mL； 2)將步驟1)中經(jīng)突變的玉米胚乳AGPase大小亞基cDNA和作為對(duì)照的野生型玉 米胚乳AGPase大小亞基cDNA分別轉(zhuǎn)化大腸桿菌glgC突變菌株，篩選分別轉(zhuǎn)化有經(jīng) 突變的玉米胚乳AGPase大小亞基cDNA和野生型玉米胚乳AGPase大小亞基cDNA的陽 性單克隆； 3)將步驟2)篩選的陽性克隆接種于Conberg加富固體培養(yǎng)平板上，在35-39℃ 下培養(yǎng)12-24小時(shí)；所述Conberg加富固體培養(yǎng)基配方為：磷酸二氫鉀8-9g，磷酸 氫二鉀10-12g，酵母提取物5-7g，葡萄糖8-12g，瓊脂15-25g，用水定容至1L， 最終pH？7.0； 4)用碘-碘化鉀溶液對(duì)在步驟3)中Conberg加富固體培養(yǎng)平板上長(zhǎng)出的單菌落 進(jìn)行染色，與對(duì)照菌落的顏色進(jìn)行比較，比對(duì)照顏色深的為突變體菌株，再經(jīng)測(cè)序驗(yàn) 證，得到玉米胚乳ADP-葡萄糖焦磷酸化酶突變體；所述碘-碘化鉀溶液是含 0.08-0.12mol/L碘和0.25-0.35mol/L碘化鉀的水溶液。 【當(dāng)前權(quán)利人】中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 【當(dāng)前專利權(quán)人地址】北京市海淀區(qū)圓明園西路2號(hào) 【統(tǒng)一社會(huì)信用代碼】12100000400018162G 【被引證次數(shù)】TRUE 【家族被引證次數(shù)】TRUE
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