【摘要】本實(shí)用新型是一種用于鍋爐爐內(nèi)承壓管水汽泄漏在線監(jiān)測(cè)裝置的聲學(xué)諧振腔式聲導(dǎo)管，它包括聲導(dǎo)管，其特點(diǎn)是：在聲導(dǎo)管內(nèi)置有與聲導(dǎo)管后端連接的諧振腔體，所述諧振腔體的結(jié)構(gòu)是，設(shè)有諧振管，在諧振管的前、后端平行設(shè)有振動(dòng)膜a和b；所述諧振腔體的振
【摘要】 本發(fā)明提供了一種利用動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)抗人CD20單克隆抗體的方法。采用本發(fā)明所述的方法生產(chǎn)抗人CD20單克隆抗體的表達(dá)量顯著高于采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系的表達(dá)量，而且所得的嵌合抗體特異結(jié)合人B淋巴瘤細(xì)胞表面抗原CD20的能力也高于采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系表達(dá)得到的抗體，生產(chǎn)成本較之采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞系來生產(chǎn)顯著降低，可產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效應(yīng)。 【專利類型】發(fā)明申請(qǐng) 【申請(qǐng)人】北京濟(jì)普霖生物技術(shù)有限公司; 李寧 【申請(qǐng)人類型】企業(yè),個(gè)人 【申請(qǐng)人地址】100094北京市海淀區(qū)圓明園西路2號(hào)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)新綜合樓1－111室 【申請(qǐng)人地區(qū)】中國(guó) 【申請(qǐng)人城市】北京市 【申請(qǐng)人區(qū)縣】海淀區(qū) 【申請(qǐng)?zhí)枴緾N200610172293.7 【申請(qǐng)日】2006-12-30 【申請(qǐng)年份】2006 【公開公告號(hào)】CN100999732A 【公開公告日】2007-07-18 【公開公告年份】2007 【IPC分類號(hào)】C12N15/09; C12N15/62; C12N15/85; C07K16/18; C12P21/08; A01K67/027 【發(fā)明人】李寧; 湯波; 余姍姍 【主權(quán)項(xiàng)內(nèi)容】1、一種利用動(dòng)物乳腺生產(chǎn)抗人CD20單克隆抗體的方法，其特征在于它 包括下述步驟： (1)合成鼠抗人CD20單克隆抗體的重鏈可變區(qū)序列，插入到含有人免 疫球蛋白γ重鏈恒定區(qū)的pCγ載體中，構(gòu)建得到抗CD20人鼠嵌合抗體的重 鏈乳腺表達(dá)載體pBC1-HuG1F； (2)合成鼠抗人CD20單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)序列，插入到含有人免 疫球蛋白κ輕鏈恒定區(qū)的pCκ載體中，構(gòu)建得到抗CD20人鼠嵌合抗體的輕 鏈乳腺表達(dá)載體pBC1-HuK1F； (3)用NotI和SalI分別雙酶切重鏈乳腺表達(dá)載體pBC1-HuG1F和輕鏈 乳腺表達(dá)載體pBC1-HuK1F，回收含有嵌合抗體重鏈的基因片段和含有嵌合 抗體輕鏈的基因片段，回收的基因片段分別溶于TE溶液，再將含有上述兩 種基因片段的溶液等摩爾比混合，混合溶液稀釋至終濃度為1.0-2.5μg/ml， 然后將所述的混合溶液注射到小鼠的受精卵原核中，再將受精卵移植到同期 發(fā)情的假孕母鼠輸卵管中，產(chǎn)生子代，鑒定，得到轉(zhuǎn)基因小鼠，利用其乳腺 來生產(chǎn)抗人CD20單克隆抗體； (4)用SalI分別酶切輕鏈乳腺表達(dá)載體pBC1-HuK1F、重鏈乳腺表達(dá)載 體pBC1-HuG1F和雙標(biāo)記選擇載體pCE-EGFP-IRES-NEO，分別回收含有嵌 合抗體輕鏈的基因片段、含有嵌合抗體重鏈的基因片段及含有綠色熒光蛋白 和新霉素抗性兩個(gè)篩選標(biāo)記的基因片段，回收的基因片段分別溶于TE溶液， 再將回收的含有嵌合抗體輕鏈基因片段的溶液和含有嵌合抗體重鏈基因片段 的溶液等摩爾比混合，然后將含有上述兩種基因片段的溶液與回收的含有雙 標(biāo)記基因片段的溶液按摩爾比3-10∶1混合，再將制得的混合溶液轉(zhuǎn)入到大 型家畜的胎兒成纖維細(xì)胞中，制得轉(zhuǎn)基因供體細(xì)胞；再將所述供體細(xì)胞核移 入去了核的卵母細(xì)胞內(nèi)，融合，培養(yǎng)，制得轉(zhuǎn)基因克隆囊胚，然后將所述的 克隆囊胚移入已同期發(fā)情的受體大型家畜的子宮內(nèi)，產(chǎn)生子代，鑒定，得到 轉(zhuǎn)基因大型家畜，利用其乳腺來生產(chǎn)抗人CD20單克隆抗體。 【當(dāng)前權(quán)利人】北京濟(jì)福霖生物技術(shù)有限公司 【當(dāng)前專利權(quán)人地址】北京市海淀區(qū)馬連洼北路158號(hào)眾鼎大廈306室 【專利權(quán)人類型】有限責(zé)任公司(臺(tái)港澳與境內(nèi)合資) 【統(tǒng)一社會(huì)信用代碼】911101087740513629 【引證次數(shù)】3.0 【被引證次數(shù)】10 【他引次數(shù)】3.0 【被自引次數(shù)】1.0 【被他引次數(shù)】9.0 【家族引證次數(shù)】3.0 【家族被引證次數(shù)】10
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